viernes, 26 de marzo de 2010

Micrótomo de hechura casera para el aficionado a la microscopía

Hace algún tiempo lo tenía pensado, pero como no tenía el torno no podía avanzar en el proyecto.
Se trata de hacerlo con algo ya hecho, un micrómetro, en argentina los made in Taiwan valen $56 es decir U$A 15 una cifra que permite el proyecto, por otro lado fabricándolo del modo propuesto el instrumento de medida queda utilizable con solo sacarle la pieza torneada, claro que sería mucho mejor sacarle el arco donde va el yunque, mas cómodo.
Estos aparatos de medida tienen una resolución de 10 micrones,cada vez que se gira completo el manguito son 0,5 mm y esta graduado de a 0,01mm, creo que para un micrótomo manual es bastante aceptable,  el problema se presenta en la cuchilla que debe ser muy buena

Aca van unas fotos para que vean como esta construido

Puede verse el micrómetro comercial y la pieza torneada en aluminio


Tiene tres prisioneros que ajustan en la parte cilíndrica, soy bastante novato con el torno y las roscas partieron el aluminio así que están arregladas con un poco de POXIPOL
 
La pieza montada en su sitio


La parte plana donde se desliza la navaja de barbero debe estar pulida a espejo, lo óptimo sería pegar sobre la misma un vidrio con una perforación del tamaño adecuado, el tornillo lateral sirve para comprimir los tacos de parafina que contienen incluida la muestra

 

La inclusión en parafina consiste en hacer un bloque con la consistencia adecuada para los cortes del tejido que nos interesa observar, en general los tejidos son blandos, imaginen un trozo de hígado que se mueve como un flan, sería imposible cortar una tajada bien finita como para ver al micro, entonces se deshidrata el tejido con alcohol cada vez mas concentrado y luego se sumerge en xileno o tolueno (ojo con el tolueno que si lo aspiran pueden quedarse drogados) este proceso hace que el tejido se ponga miscible con la parafina, hecho esto se hace un taco de parafina con el tejido dentro y recién luego se procede a cortarlo.

Estos son órganos de pollo, están en formol al 10% para fijar, pueden disecar una rata y guardar sus órganos en formol al 10% a los pulmones conviene inflarlos desde la tráquea con la misma solución valiéndose de una jeringa

El corazón de un pollo

En esta imagen pueden verse los tubos con alcohol a distintos porcentajes hasta llegar al alcohol absoluto, en este caso estoy preparando un tallo vegetal a ver que sale, el frasco de boca ancha a la derecha  tiene el xileno, el tiempo en cada tubo es de 15 minutos y en el xileno igual

Luego del xileno la muestra se pasa a parafina que se ha calentado hasta que este bien líquida, ojo cuando largan el tejido al tubo porque se producen proyecciones de parafina el xileno es muy volátil y se evapora, el tejido en el interior burbujea, se deja una media hora en la parafina caliente (para que se mantenga asi puse el tubo sobre un foco encendido
 
Transcurrido el tiempo se preparan los tacos, con una tira de papel rodeando alguna tapa que entre mas o menos justo en el receptáculo del micrótomo

Se acomoda el tejido en el receptáculo y se llena con parafina fundida


Luego se recorta el taco en forma de pirámide truca y se lo pone al micrótomo (obviamente cuando esta la parafina bien dura, conviene dejarlo en freezer una hora)
Puse una moneda en el fondo del receptáculo para que empuje parejo el vástago del micrómetro.

En esta última imagen hay un taco con un trozo de corazón del que saque algunas muestras.

Importante es la navaja, este tipo que se muestra en la imagen se adapta muy bien consiguiendo cortes bastante delgados de unos 30 micrones





 
El video del corte

Puede haber errores de técnica solo soy aficionado a esto y solo cuento lo que he he probado

Por el momento no he logrado una buena coloración de los cortes de tejidos animales, pero salen lo suficiente delgados para poder ver por el microscopio, agrego a continuación unas fotos de tallos vegetales sin coloración previa donde se distinguen claramente los tejidos que lo forman

domingo, 7 de marzo de 2010

Mitosis en células meristemáticas primarias de raíz de cebolla

Las células meristemáticas son células que se encuentran en los vegetales y que tienen la facultad de dividirse, hay dos tipos las primarias y las secundarias, las primarias hacen crecer al vegetal en longitud, están en las yemas y en las puntas de las raíces y las secundarias hacen crecer al vegetal en grosor, están después del segundo año en troncos de vegetales.
Estuve trabajando para poder visualizar células en estado de mitosis que es una de las formas que tienen las células para dividirse, en raíces de cebolla.
He conseguido algunas imágenes interesantes que pongo aquí, solo que he tenido que colorear con hematoxilina eosina que es un tipo de coloración medio complicada, estoy tratando de teñir con giemsa solo que las apetencias tintoriales de las células inmaduras son distintas a las de células diferenciadas y salen oscuras, ya probaré mas y pondré técnicas bien accesibles. Por ahora para que se entusiasmen algunas fotos.

Se colocan tres palillos clavados en la cebolla, en la parte ecuatorial de la misma y se sumerge en agua en un recipiente, al cavo de unos 4 días tendrán las raicillas como se muestran

 
La cebolla con sus raíces, algunas sin sus puntas que  utilicé para los preparados

 
Lo que les decía de las apetencias tintoriales las mas diferenciadas tiene el citoplasma mucho mas claro

 

Si buscan en google podrán reconocer en que fase de la mitosis se ajusta

 

 

 

Las fases

He conseguido ver estas mitosis usando coloración de hematoxilina eosina, la técnica es la siguiente:

Se consiguen  7 frascos de unos 250 cc donde pondremos los colorantes y otros líquidos necesarios,

Frasco 1 Hematoxilina liquida hasta la mitad

Frasco 2 Agua

Frasco 3 Eosina hasta la mitad

Frasco 4 Agua

Frasco 5 Alcohol de 98 º

Frasco 6 Alcohol absoluto 100º

Frasco 7 Xilol

Los colorantes no se tiran sirven para hacer muchas coloraciones.

Como preparar las muestras y teñir

Se cortan los ápices de las raicillas (unos 2 mm) y se los colocan en una solución de  acido acético al 45%, se calienta hasta ebullición, se deja enfriar y se repite la operación. De esta manera las raicillas se ponen bastante transparentes
Seguidamente colocamos el material sobre un porta, en el extremo del mismo y hacemos un scquash (igual que para los cromosomas gigantes), esto es colocar sobre el material un cubreobjetos y envolver con servilleta de papel luego apoyar en porta sobre una superficie plana y con el pulgar hacer presión sobre el lugar donde esta el cubre, presionar lo mas que se pueda para que se disgregue el material, hecho esto se despega el cubre con cuidado tratando que quede la mayor parte del material en el porta, con el cubre que siempre queda con material se puede volver a realizar la operación en el porta un poco mas arriba de donde la hicimos la primera vez
Se deja secar al aire y se procede a teñir

10 minutos en frasco numero 1

5 minutos en frasco 2

5 minutos en frasco 3

Enjuagar el preparado en el frasco 4 cambiando dos o 3 veces el agua

2 minutos en frasco 5

2 minutos en frasco 6

5 minutos en frasco 7

Dejar secar al aire y para la observación se coloca una gota de vacelina líquida sobre la muestra extendiendola bien. Se observa  con lente panorámica de 10X y luego con 40x cuando localizamos una imagen mitótica

Se puede teñir tambien con orceína en forma directa colocando 1 gota de orceína sobre las raicillas dejando unos 10 minutos y luego haciendo el squash, yo no dispongo ese colorante asi que lo dicho anteriormente lo he leído. También según alguien comentó con solución de lugol o tintura de yodo pueden verse, tampoco tengo experiencia al respecto, hay que probar.